細胞培養(yǎng)實驗室應(yīng)至少能夠執(zhí)行:無菌處理、孵化、制備、清洗、滅菌、存儲。無菌操作區(qū)域僅限于細胞培養(yǎng)和其他無菌操作區(qū)域,最好與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。
理想的無菌操作室應(yīng)分為三個部分:更衣室——更換衣服、鞋子,穿戴帽子和面具。緩沖室 ——位于更衣室和手術(shù)室之間,以確保手術(shù)室內(nèi)的無菌環(huán)境,并放置恒溫培養(yǎng)箱和一些必要的小器械。無菌室——專用于無菌處理、細胞培養(yǎng);房間大小應(yīng)適當,頂部不宜過高不超過2.5m,以確保紫外線的有效殺菌效果;墻壁光滑,無死角,方便清潔和消毒;工作臺不應(yīng)靠墻放置,臺面要平滑壓塑作表面,涂漆成白色或灰色。
凈化工作臺:操作簡單,安裝方便,占用空間小,凈化效果好,在一般細胞培養(yǎng)實驗室中主要使用的兩種的凈化工作臺:側(cè)流或垂直式、外流或水平層流式。
孵化區(qū):盡管該區(qū)域?qū)o菌的要求并不比無菌區(qū)域嚴格,但它們?nèi)匀恍枰鍧崯o塵,因此也應(yīng)放置在干擾少的區(qū)域。孵育可以在培養(yǎng)箱中或控制溫度的溫室中進行,相比之下溫室是費用較高,通常實驗室多采用培養(yǎng)箱孵育。
制備區(qū):在該區(qū)域中,主要進行培養(yǎng)液,有關(guān)培養(yǎng)用液等實驗用品的制備。
存儲區(qū)域:主要存放各種冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境還需要清潔無塵。
清潔和消毒區(qū)域:清潔和消毒區(qū)域應(yīng)與其他區(qū)域分開,主要用于清潔所有細胞培養(yǎng)容器、準備、消毒及三蒸水制造等。
細胞實驗室常用設(shè)備有:
顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細胞的生長情況并觀察有無污染等。
培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細胞和體內(nèi)細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃,細胞在溫度升高2℃時,持續(xù)數(shù)小時即不能耐受,40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱,如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。
干燥箱:用于細胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。水純化裝置:細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高,細胞培養(yǎng)以及與細胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。水純化時可采用離子交換裝置或蒸餾器。離子交換純水尚不能有效去除有機物,因此用水時尚需再次蒸餾。
冰箱:普通冰箱或冷藏柜;低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱。
細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格,選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量三種因素。
離心機:進行細胞培養(yǎng)時,常規(guī)需要進行制備細胞懸液、調(diào)整細胞密度、洗滌、收集細胞等工作,通常需要使用離心機。
天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
消毒器:一般為高壓蒸汽滅菌鍋,直接或間接與細胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
濾器:細胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液,包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用濾過消毒以除去細菌。
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